基因表达载体构建步骤
操作步骤如下:
1、用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现缺口,露出黏性末端;
2、再用同一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端;
3、将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处;
4、再使碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键;
5、再加入适量的DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组DNA分子。
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