革兰氏染色的注意事项

注意事项

1、选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。

2、涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。

3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性。

实验流程

1、取载玻片用纱布擦干,载玻片的一面用马克笔画一个小圈(用来大致确定菌液滴的位置)。涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂。

2、涂片

液体培养基:左手持菌液试管,在酒精灯火焰附近5厘米左右打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌,等冷却后从试管中沾取菌液一环,在洁净无脂的载玻片上涂直径2毫米左右的涂膜,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

固体培养基:先在载玻片上滴一滴无菌水,再用接种环取少量菌体,涂在载玻片上,使其薄而均匀。

3、晾干:让涂片在空气中自然干燥。

4、固定:让菌膜朝上,通过火焰2-3次固定(以不烫手为宜)。

5、染色:将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液,染1分钟。

6、水洗:用水缓慢冲洗涂片上的染色液,用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。

7、媒染:滴加1滴碘液,染1分钟,水洗。

8、脱色:吸去残留水,连续滴加95%乙醇脱色20-30秒至流出液无紫色,立即水洗。

9、复染:滴加蕃红复染3-5分钟,水洗。至此,革兰氏染色结束。

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