单克隆抗体的制备步骤
1、免疫动物
免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程;
2、细胞融合
采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞;
3、选择性培养
选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基;
4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化
采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增;
5、单克隆抗体的大量制备
单克隆抗体的大量制备一般采用动物体内诱生法和体外培养法。
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