酶动力学参数如何测定

酶动力学参数的测定方法:

1、取50毫升三角瓶4个,加入5毫升甲醛与一滴酚酞,以标准氢氧化钠滴定至微红色,四个瓶颜色要一致,编号;

2、取量40克每毫升酪蛋白50毫升,加入一150毫升三角瓶,37摄氏度保温10分钟,同时胰蛋白酶也在37摄氏度保温10分钟,然后吸取5毫升酶液加到酪蛋白液中,充分混合后立即取出10毫升反应液,加入一含甲醛的三角瓶中作为1号,在2,4,6分钟时分别取出10毫升反应液,加入2,3,4号小三角瓶中;

3、在小三角瓶中分别加10滴酚酞,用氢氧化钠滴至微红,在接近终点时,按耗去氢氧化钠的毫升数,每毫升加一滴酚酞,在继续滴至终点,记下耗去的氢氧化钠的毫升数;

4、以滴定度对时间作图,得一条直线,其斜率即为初速度r1;

5、分别量取30克每升、20克每升、10克每升的酪蛋白溶液,重复上述操作,分别测出r2、r3、r4;

6、用以上结果作图求出还参数。

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