求问引物合成的具体实验步骤
引物合成的具体实验步骤:
1、脱掉附加在CPG担体上的第一个碱基5羟基基团上的保护基,准备附加下一个新的碱基;
2、活化新的碱基单体,准备与第一个碱基进行反应;
3、第二个碱基与第一个碱基发生偶联反应;
4、将没有反应的第一个碱基的5羟基加帽封死,使其不再进一步参与反应;
5、将核苷亚磷酸酯氧化成更稳定的核苷磷酸酯。
6、重复进行第一步到第五步的循环,直至合成完所需的Oligo DNA序列。
7、合成结束后,将Oligo DNA分子从CPG上切下,再进行进一步的纯化。
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